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外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一血液分离机

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外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一血液分离机

发布日期:2016-05-09 16:04 来源:http://www.lyzkjs.com 点击:

  血液分离机在体外进行细胞免疫检测时,首先必须进行淋巴细胞的分离。分离淋巴细胞的方法很多,但不管采用哪种方法,均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多,而且不丧失活性,同时也要求分离技术简单、操作方便。 外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一,两类细胞的大小和密度不同,其沉降速度也就不同。红细胞的自然沉降率较快,加入高分子量的聚合物,如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度离心法或二者结合,可以将淋巴细胞从血液中分离出来。这种分离出的淋巴细胞一般包括单核细胞。除去单核细胞,可以利用单核细胞的吸附功能,如铁颗粒、玻璃面或尼龙网等,除去(或分离)单核细胞,从而提纯淋巴细胞。

  1.采血法  各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血,猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血,家禽由翼下静脉或心脏采血,兔由心脏或耳静脉采血,犬由颈静脉或四肢静脉采血,豚鼠由心脏采血,小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。  

  2.抗凝  采集血液最关键的问题是抗凝,采用什么方法进行抗凝,则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下:  

  1)肝素抗凝:采血时,使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血时,边采血边轻轻摇动,使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。  

  2)EDTA抗凝:采血前,用灭菌生理盐水将EDTA配制成4%溶液,然后按预采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血,并不断摇动采血容器,使之混匀。  

  3)玻璃珠法:预先将适量的玻璃珠(根据采血量多少而定)清洗后,装入采血容器中,灭菌后备用。采血过程中,边采边摇采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滚动,以机械地除去纤维蛋白,使血液不能凝固。本法虽较麻烦,但对淋巴细胞的活性影响最小,且可减少血小板的混杂。

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